兰州大学机构库
慢病毒介导的Jab1基因表达干扰对骨肉瘤细胞功能的影响及机制研究
马靖琳; 王栓科; 汪静; 安丽萍; 刘鹏
2018
Keyword慢病毒 Jab1基因 骨肉瘤 p53 调控机制
Abstract1、课题来源与背景a.课题来源甘肃省科技厅自然科学研究基金计划青年基金项目b.课题背景骨肉瘤肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤之一,好发于青少年,虽然通过手术和化疗手段可以得到很好治疗,但是仍易发生转移,五年生存率低。近年来,人们发现转录联合因子c-Jun结合蛋白(c-jun-activation-domainbindingprotein,Jab1)能够影响细胞的增殖、分化、存活及细胞周期,从而促进肿瘤的发生。Jab1在许多种肿瘤中都过表达,包括乳腺癌和肺癌。在一些转移癌中,Jab1的表达与肿瘤抑制因子p27和p53的表达呈负相关。重要的是,Jab1也与DNA损伤修复有关,Jab1水平的下调使细胞对伽马射线敏感,提示Jab1是一种癌症治疗潜在的靶点。小鼠基因研究显示p53是骨肉瘤发生的决定性因子。有趣的是,Jab1是p53的反向调节子。然而,Jab1在骨肉瘤的发生发展中发挥怎样的作用尚不清楚。研究显示Jab1的缺失会导致小鼠严重的骨骼发育不全,并伴随肿瘤促进因子基质金属蛋白酶表达的大量下降。此外,Jab1的缺失使软骨细胞表现出促进细胞凋亡和改变细胞周期,提示一种DNA损伤修复的缺陷。基于这些研究,我们猜测Jab1是通过抑制肿瘤抑制因子p53、p27和增强原癌基因因子基质金属蛋白酶(MMPs),从而促进骨肉瘤细胞的发生和发展。总之,我们的研究将拓展人们对Jab1在骨肉瘤发生和发展中的作用的认识,基于调控Jab1介导的肿瘤发生产生的新的治疗方法将开创一个骨肉瘤及其他肿瘤治疗的全新时代。2、研究目的与意义a.研究目的本研究通过建立慢病毒介导的Jab1表达干扰系统来研究其对骨肉瘤细胞增殖、周期变化、凋亡及体外侵袭能力的影响;通过检测相关效应因子的表达水平,探索Jab1对骨肉瘤细胞的调控机制,为骨肉瘤的防治提供科学依据。b.研究意义通过建立慢病毒介导的Jab1表达干扰系统来研究其对骨肉瘤细胞增殖、周期变化、凋亡及体外侵袭能力的影响;通过检测相关效应因子的表达水平,探索Jab1对骨肉瘤细胞的调控机制,在理论上丰富和完善人们对Jab1在骨肉瘤发生发展中作用的认识,为临床上寻找新的治疗骨肉瘤的方法和靶向药物提供理论依据。本项目研究成果将在骨肉瘤的临床治疗和制药业方面带来巨大的经济效益,对我国的经济建设将带来积极的影响。3、主要论点与论据论点一:建立Jab1表达干扰系统。论点二:Jab1对骨肉瘤细胞增殖、周期变化、凋亡及体外侵袭能力的影响。论点三:Jab1促进骨肉瘤发生发展的调控机制。论据一:用制备的对照慢病毒和Jab1基因的shRNA干扰慢病毒分别感染骨肉瘤细胞系Saos2细胞,72小时后抽提相应细胞的总RNA和总蛋白,分别进行实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹(Westernblot),检测细胞内Jab1转录和翻译水平,成功建立Jab1表达干扰系统。论据二:在Jab1表达干扰的骨肉瘤细胞系中,通过MTT实验发现,骨肉瘤细胞增殖明显下降;通过流式细胞仪检测实验发现,骨肉瘤细胞周期出现G2/M期或G1期阻滞,而且细胞出现凋亡现象;通过AnnexinV结合实验和TUNEL实验发现,骨肉瘤细胞侵袭及转移能力明显下降。论据三:采用RT-PCR和Westernblot检测p27,p53及MMPsmRNA和蛋白质的表达水平,结果显示,p27、p53的mRNA和蛋白质表达水平均上升,而MMPs的mRNA和蛋白质表达水平均下降。以上这些结果,阐述了Jab1通过抑制肿瘤抑制因子p53、p27和增强MMPs促进骨肉瘤的发生和发展。4、创见与创新本研究首次提出Jab1基因对骨肉瘤细胞功能的影响,并顺藤摸瓜,对其发挥作用的机制进行全面阐述,将丰富和完善骨肉瘤发生发展及相关信号通路的理论思想,为Jab1成为临床上治疗骨肉瘤的新的靶点提供了思路,具有重要的科学价值和潜在的临床应用前景。同时,筛选可能用于骨肉瘤患者早期诊断的分子标志物,为降低骨肉瘤发病率和死亡率提供科学依据。5、社会经济效益,存在的问题a.社会经济效益本课题通过建立慢病毒介导的Jab1表达干扰系统来研究其对骨肉瘤细胞增殖、周期变化、凋亡及体外侵袭能力的影响;通过检测相关效应因子的表达水平,探索Jab1对骨肉瘤细胞的调控机制,我们发现Jab1通过抑制肿瘤抑制因子p53、p27和增强MMPs促进骨肉瘤的发生和发展,这在理论上丰富和完善人们对Jab1在骨肉瘤发生发展中作用的认识,为临床上寻找新的治疗骨肉瘤的方法和靶向药物提供理论依据。本项目研究成果在骨肉瘤的临床治疗和制药业方面带来了巨大的经济效益,对我国的经济建设带来了积极的影响。b.存在的问题本研究设计到的动物模型实验、检测费用及材料费用较高,大部分病人要求支付相应补偿费用后才愿意提供临床新鲜标本,由于课题经费只有2万元,非常紧张,同时课题时间较短,无法将原定实验计划按期完成。我们将在前期实验基础上努力申请其他经费,以便完成剩余的课题任务。由于本项目的研究工作没有完全结束,后续工作仍将继续,目前还有1篇英文文章正在投稿中。6、历年获奖情况无
album医药卫生科技
special subject外科学;肿瘤学
Subject classification number320.67
Category of achievements基础理论
Achievement level未评价
Research start and end time2015-07~2017-06
Evaluation form结题
URL查看原文
CLCR738.1
Document Type科技成果
Identifierhttps://ir.lzu.edu.cn/handle/262010/562354
Collection兰州大学
第二临床医学院
Affiliation
兰州大学第二医院
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GB/T 7714
马靖琳,王栓科,汪静,等. 慢病毒介导的Jab1基因表达干扰对骨肉瘤细胞功能的影响及机制研究. 2018.
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